Genetic studies of a thermoregulated gene in the psychrotrophic bacterium Pseudomonas fluorescens
Résumé
In the psychrotrophic bacterium Pseudomonas fluorescens, some genes are thermoregulated: they are maximally expressed at a particular temperature within the broad range of temperatures that allow growth of this bacterium. To study this regulation, random transcriptional insertion fusions were obtained by means of mini-Tn5lacZ1 or mini-Tn5luxAB transposition. One fusion was studied in which β-galactosidase production was maximal at a low-growth temperature. The mutated gene (that we call xsf) was highly homologous to xseA from Escherichia coli (and from other bacteria) which encodes the large subunit of exonuclease VII. Genetic tools were constructed in order to analyse and manipulate this fusion: a plasmid derived from R68.45 was used for chromosome transfer and a replacement vector was constructed to allow in situ marker exchange of the mini-Tn5lacZ1 by an Hgr interposon. This vector was used to make double mutants and hence to study the effect of the insertion in xsf on the expression of other fusions. Six genes were thereby identified with a decreased expression in an xsf – background and with different characteristics of thermoregulation.
Études génétiques d'un gène thermorégulé de la bactérie psychrotrophique Pseudomonas fluorescens. Chez la bactérie psychrotrophe, Pseudomonas fluorescen, certains gènes sont thermorégulés (exprimés de façon maximale à une température particulière de leur large gamme de températures de croissance). Pour étudier cette régulation, des fusions transcriptionnelles ont été réalisées par insertion aléatoire de mini-transposons (mini-Tn5lacZ et mini-Tn5luxAB). Une fusion chez laquelle la production de β-galactosidase est maximale à basse température de croissance est étudiée ici. Le gène muté (que nous avons dénommé xsf) est fortement homologue du gène xseA de Escherichia coli (et d'autres bactéries), qui code la grande sous-unité de l'exonuclease VII. Des outils génétiques ont été construits pour analyser et manipuler cette fusion : l'utilisation d'un plasmide dérivé de R68.45 pour réaliser du transfert chromosomique, et la construction d'un vecteur de remplacement pour effectuer l'échange in situ de marqueurs. Des doubles mutants ont été construits pour étudier l'effet de la mutation dans xsf sur l'expression d'autres fusions. Six gènes, différant par leur thermorégulation, voient leur expression réduite dans un environnement xsf.